Pengaruh Triterpen Glikosida Teripang Timbu Kolong (Holothuria atra) terhadap Ekspresi Protein Fas dan Bcl-2 dalam Induksi Apoptosis pada Kultur Sel Supri’s Clone 1 (Sp-C1) sebagai Terapi Karsinoma Sel Skuamosa Lidah

Abstract

Squamous cell carcinoma of the oral cavity has the sixth highest incidence among various forms of cancer worldwide and eight of the most common cancers in the world. Squamous cell carcinoma of the oral cavity tends to increase and more than 90% of all oral cancers. Standard treatment is surgery, radiotherapy, chemotherapy or combination, but most patients with oral carcinoma, especially tongue carcinoma come in an advanced stage. Over the past few decades, there has been no effective systemic therapy for patients with advanced stage carcinoma, so the prognosis of patients with advanced carcinoma of the tongue is still poor. In carcinoesis, apoptotic dysregulation involving the Fas and Bcl-2protein expressiones is associated with tumor development, progression, and tumor resistance to therapy. One of the treatments being developed is the search for natural / herbal ingredients. This insight spurs the development of a therapeutic strategy targeted to activate apoptosis so that it can kill cancer cells. Triterpen glikosida contained in timbu cucumber has potency anticancer expected to induce apoptosis by intervening path involving protein expression of Fas and Bcl-2 The purpose of this study was to isolate the active compound triterpen glikosida of black sea cucumber and explore the effect of the active compound on the protein expression of Fas and Bcl-2 as the molecular mechanism of apoptosis to find molecular targets of tongue squamous cell carcinoma therapy.The study was a laboratory experimental study consisting of 2 stages. The first phase of the study was descriptive explorative to isolate the triterpen glycoside active compound from extract and fractionation of 3 types of sea cucumber (1)Black sea cucumber (Holothuria atra), (2)Bohadschia marmorata and (3) Stichopus variegatus cytotoxic test was performed as an ideal model of potential anticancer at that is a bioactive compound of 3 sea cucumbers that have the potential to kill cancer cells. The second phase of the study was an experimental in vitro study with complete randomized design (RAL) in the form of active triterpen glycoside trait test of trepang cucumber to assess its effect on Fas and Bcl-2 protein expression in induction of apoptosis on cell culture of Sp-C1. The study group consisted of a control group and a group of active triterpen glycoside compound trunks of cucumber dock with dose of 0.5xIC50, IC50, 1xIC50, 2xIC50 and 2.5xIC50 with observation time at 24 hours. Protein expression was measured by immunocytochemistry, while apoptotic detection Double Staining Ethidium Bromida Acridin Orange. The result of this research showed that active triterpen glycoside compound of trepang cucumber has a very strong anticancer activity (IC50 = 0,23 μg / mL) to Sp-C1. The optimum protein expression of Fas and Bcl-2 for successful apoptosis initiation occurred at doses of 2xIC50 and 2.5xIC50 Keywords: apoptosis, protein expression of Fas and Bcl-2, Supri's-Clone 1 (Sp-C1), sea cucumber (Holothuria atra), triterpen glycoside, target therapy . There is a very strong relationship between expression of each of the Fas and Bcl-2 es with r values of 0.698 and 0.812 respectively with apoptosis r = 0.837. So the higher the dosage of active triterpenes of trusspole glikosida sea cucumber is higher then apoptosis in Sp-C1 culture. This indicates that the active triterpen glycoside compound of trepang cucumbers causes the e expression to produce a signal peak that activates the apoptotic phase of execution and shows the interaction between the extrinsic and intrinsic pathways thus strengthening the apoptotic induction process in inhibiting cancer growth. It was concluded that the active compound triterpenes of trunks of sea cucumber glycoside are very strong anticancer that can affect the protein expression of Fas and Bcl-2 e in inducing apoptosis.

Karsinoma sel skuamosa rongga mulut memiliki insiden tertinggi keenam diantara berbagai bentuk kanker diseluruh dunia dan delapan kanker yang paling umum di dunia. Karsinoma sel skuamosa rongga mulut cenderung bertambah dan lebih dari 90% dari semua kanker mulut. Pengobatan standar yang dilakukan adalah pembedahan, radioterapi, kemoterapi maupun kombinasi, namun kebanyakan penderita karsinoma rongga mulut terutama karsinoma lidah datang dalam stadium lanjut. Selama beberapa dekade terakhir, tidak ada terapi sistemik yang efektif untuk penderita karsinoma lidah dengan stadium lanjut, sehingga prognosis penderita karsinoma lidah pada stadium lanjut masih buruk. Dalam karsinoesis, disregulasi apoptosis yang melibatkan protein Fas dan Bcl-2 berhubungan dengan perkembangan tumor, progresivitas, serta resistensi tumor terhadap terapi. Salah satu perawatan yang sedang dikembangkan antara lain pencarian bahan alam/herbal. Wawasan ini memacu dikembangkannya strategi terapi yang ditargetkan untuk mengaktifkan apoptosis sehingga dapat membunuh sel kanker. Triterpen glikosida yang terkandung dalam teripang timbu kolong (Holothuria atra) memiliki potensi antikanker diharapkan mampu menginduksi apoptosis dengan mengintervensi jalur yang melibatkan ekspresi protein Fas dan Bcl-2. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengisolasi senyawa aktif triterpen glikosida teripang timbu kolong dan mengeksplorasi pengaruh senyawa aktif terhadap ekspresi protein Fas dan Bcl-2 sebagai mekanisme molekuler apoptosis untuk menemukan target molekuker terapi karsinoma sel skuamosa lidah. Penelitian merupakan studi eksperimen laboratorium yang terdiri atas 2 tahap. Penelitian tahap 1 bersifat deskriptif eksploratif untuk mengisolasi senyawa aktif triterpen glikosida mulai dari ekstrak dan fraksinasi dari 3 jenis teripang (1) timbu kolong (Holothuria atra), (2) teripang cempedak (Bohadschia marmorata) dan, (3) teripang gamat (Stichopus variegatus) dilakukan uji sitotoksik sebagai model ideal antikanker yang potensial yaitu senyawa bioaktif dari 3 teripang yang memiliki potensi untuk membunuh sel kanker. Penelitian tahap 2 merupakan penelitian eksperimental in vitro dengan rancangan acak lengkap (RAL) berupa uji pemberian senyawa aktif triterpen glikosida teripang timbu kolong untuk menilai pengaruhnya terhadap ekspresi protein Fas dan Bcl-2 dalaminduksi apoptosis pada kultur sel Sp-C1. Kelompok penelitian terdiri atas kelompok kontrol dan kelompok yang diberi senyawa aktif triterpen glikosida teripang timbu kolong dengan dosis 0,5xIC50, IC50, 1,5xIC50, 2xIC50 dan 2,5xIC50 dengan waktu pengamatan pada jam 24. Ekspresi protein diukur dengan metode immunositokimia, sedangkan deteksi apoptosis menggunakan metode Double Staining Ethidium Bromida Acridin Orange Hasil yang didapatkan adalah senyawa aktif triterpen glikosida teripang timbu kolong memiliki aktivitas antikanker yang sangat kuat (IC50=0,23 μg/mL) terhadap Sp-C1. Ekspresi optimum Fas dan Bcl-2 untuk inisiasi apoptosis berturut-turut terjadi pada dosis 2xIC50 dan 2,5xIC50 Kata kunci : apoptosis, ekspresi protein Fas dan Bcl-2, Supri’s-Clone 1 (Sp-C1), teripang timbu kolong (Holothuria atra), triterpen glikosida, target terapi . Terdapat hubungan yang sangat kuat antara ekpresi masing-masing Fas dan Bcl-2 dengan nilai r berturut-turut 0,698 dan 0,812 dengan tingkat apoptosis r=0,837. Jadi semakin tinggi pemberian dosis senyawa aktif triterpen glikosida teripang timbu kolong maka semakin tinggi apoptosis pada kultur sel Sp-C1. Hal ini menandakan pemberian senyawa aktif triterpen glikosida teripang timbu kolong menyebabkan ekspresi protein tersebut menghasilkan puncak sinyal yang mengaktivasi fase eksekusi apoptosis dan menunjukkan interaksi antara jalur ekstrinsik dan instrinsik sehingga memperkuat proses induksi apoptosis dalam menghambat pertumbuhan kanker. Disimpulkan bahwa senyawa aktif triterpen glikosida teripang timbu kolong merupakan antikanker yang sangat kuat yang dapat mempengaruhi ekspresi protein Fas dan Bcl-2 dalam menginduksi apoptosis.