Aktivitas Imunomodulator Ekstrak Herba Poguntano (Picria fel-terrae Lour.) Terhadap Sel RAW 264.7 Secara In Vitro

Abstract

Poguntano (Picria fel-terrae Lour.) merupakan salah satu tumbuhan obat di Sumatera Utara yang telah digunakan dalam pengobatan tradisional untuk mengatasi penyakit degeneratif dan metabolisme. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek viabilitas sel, produksi NO (Nitric Oxide) dan ekspresi gen Tumor Necrosis Factor (TNF)-α, interleukin (IL)-6, interleukin (IL)-1β, inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) dari ekstrak n-heksana herba poguntano (ENHP), ekstrak etilasetat herba poguntano (EEAHP) dan ekstrak etanol herba poguntano (EEHP) pada sel RAW 264.7 yang diinduksi dengan lipopolisakarida (LPS). Simplisia dimaserasi dengan pelarut n-heksana, etilasetat dan etanol secara bertingkat. Skrining fitokimia ditentukan dengan metode kromatografi lapis tipis. Pengujian viabilitas sel dengan metode MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolium bromida], pemeriksaan produksi NO pada sel RAW 264.7 yang diinduksi dengan LPS menggunakan pereaksi Griess dan pengujian ekspresi gen TNF-α, IL-6, IL-1β, iNOS pada sel RAW 264.7 yang diinduksi dengan LPS dengan metode Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). Hasil skrining fitokimia dari ENHP mengandung golongan senyawa steroid/triterpenoid sedangkan EEAHP dan EEHP mengandung flavonoid, glikosida, saponin dan tanin. Pengujian viabilitas sel dari ENHP; EEAHP; EEHP tidak menunjukkan efek toksik pada konsentrasi 12,5 dan 25 μg/mL dengan persentase sel hidup (>90%) secara berurutan sebesar (92,48±0,23; 93,83±0,26; 98,76±0,35) dan (90,14±0,31; 92,22±0,26; 94,78±0,13). Hasil analisis statistik pemeriksaan produksi NO menunjukkan bahwa pemberian ENHP; EEAHP; EEHP (12,5 dan 25 μg/mL) pada sel RAW 264.7 yang diinduksi dengan LPS menghasilkan penurunan kadar NO terbesar pada ENHP (25 μg/mL) sebesar 10,42±1,82 μg/mL yang menunjukkan efek tidak berbeda secara signifikan terhadap kontrol positif dan kontrol normal (p>0,05). Hasil analisis statistik pengujian ekspresi gen iNOS, TNF-α, IL-6, IL-1β dari ENHP; EEAHP; EEHP pada sel RAW 264.7 yang diinduksi dengan LPS menurunkan nilai densitas ENHP; EEAHP; EEHP. Pada ekspresi iNOS menghasilkan nilai densitas paling kecil adalah ENHP (0,67±0,012) menunjukkan efek tidak berbeda secara signifikan dengan kontrol positif dan nilai densitas ekspresi TNF-α paling kecil pada EEAHP (1,03±0,012) menunjukkan efek tidak berbeda secara signifikan dengan kontrol normal, selanjutnya nilai densitas ekspresi IL-1β paling kecil pada EEHP (1,80±0,006) menunjukkan efek berbeda secara signifikan dengan kontrol normal, kontrol positif dan kontrol negatif (p<0,05), kemudian nilai densitas ekspresi IL-6 paling kecil pada ENHP (1,27±0,008) menunjukkan efek berbeda secara signifikan dengan kontrol normal, kontrol positif dan kontrol negatif. Berdasarkan hasil penelitian ini, ENHP; EEAHP; EEHP tidak menunjukkan efek toksik pada sel RAW 264.7 dan dapat menghambat produksi NO serta menghambat ekspresi gen TNF-α, IL-6, IL-1β, iNOS sehingga ENHP; EEAHP; EEHP efektif memiliki aktivitas imunomodulator.

Poguntano (Picria fel-terrae Lour.) is one of the medicinal plants in North Sumatera that has been used in the folk medicine to treat degenerative and metabolic diseases. This study aimed to determine the cells viability effects, Nitric Oxide (NO) production and the gene expression of Tumor Necrosis Factor (TNF)-α, interleukin (IL)-6, interleukin (IL)-1β and inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) on n-hexane extracts of Picria fel-terrae Lour Herb (NEPFH), ethylacetate extracts of Picria felterrae Lour Herb (EEAPFH) and ethanol extracts of Picria fel-terrae Lour Herb (EEPFH) toward RAW 264.7 cells induced by lipopolysaccharide (LPS). The dried materials macerated with n-hexane, ethylacetate and ethanol solvents, sequentially. The phytochemical screening was determined by thin layer chromatography method. Cell viability assay was performed by MTT [3-(4,5- dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolium bromide] method. Measurement NO production on RAW 264.7 cells induced by LPS was evaluated by Griess reagent and measurement gene expression of TNF-α, IL-6, IL-1β and iNOS on RAW 264.7 cells induced by LPS was determined by Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) method. Phytochemical screening results of NEPFH contained steroids/triterpenoid compounds while EEAPFH and EEPFH contained flavonoids, glycosides, saponins and tannins. Measurement cell viability of NEPFH; EEAPFH; EEPFH don’t showed a toxicity effect at concentration 12.5 and 25 μg/mL with the percentage of live cells (>90%), sequentially (92.48±0.23;93.83±0.26;98.76±0.35) and (90.14±0.31; 92.22±0.26; 94.78±0.13). Statistical analysis results of the examination of NO production indicated that the administration of NEPFH; EEAPFH; EEPFH (12.5 and 25 μg/mL) in RAW 264.7 cells induced by LPS resulted in the greatest decrease in NO value is NEPFH (25 μg/mL) of 10.42±1.82 μg/mL which showed that the effect was not significantly different towards positive controls and normal controls (p>0.05). Statistical analysis result of TNF-α, IL-6, IL-1β, iNOS gene expression measurement from NEPFH; EEAPFH; EEPFH in RAW 264.7 cells induced with LPS decreased the density value of NEPFH; EEAPFH; EEPFH. The iNOS expression resulted the smallest density value is NEPFH (0.67±0.012) showed that the effect was not significantly different from positive control and the smallest TNF-α expression density value is EEPFH (1.03±0.012) showed that the effect was not significantly different from normal control, while the smallest density value of IL-1β expression is EEPFH (1.80±0,006) showed significantly different effects with normal controls, positive controls and negative controls (p<0.05), and the smallest IL-6 expression density value is NEPFH (1.27±0.008) showed significantly different effects with normal control, positive control and negative control. Based on the results of this study, NEPFH, EEAPFH, EEPFH don’t showed a toxicity effect in RAW 264.7 cells and has reduced NO production and gene expression suppression of TNF-α, IL-6, IL-1β and iNOS so that it effectivelly has immunomodulatory activity.